ABSTRACT
Peripheral nerves can be injured by traumatisms or mechanical causes, and thermal, ischemic or tumoral damage, this could present inconveniences of the mobility, sensibility and loss of motor function at the denervated area. The surgical techniques applied to repair nerves have gone through several phases of evolution such as the tubulization technique which consists of a prosthesis with a pipe shape at the segment injured. In this work the biomaterial utilized to manufacture the prosthesis was chitosan, since this compound allows to incorporate to its matrix promoting nervous growing substances that are released in situ for a long time while being degraded by titular lysosomes of organic origin. It is known, by diverse studies, that several neurosteroids are involved during the regeneration process of peripheral nerves, which functions are already described, as pregnenolone. In order to determine if there was or not regeneration and the degree of maturity of this ,12 young French Poodle female dogs of 1 to 1.5 years old were used (four were used as intact control group, four were subjected to tubulization technique with chitosan, and four went into tubulization technique with chitosan and pregnenolone neurosteroid, which is a stem hormone), in order to correct 15 mm of axotomized segment. The regenerated nerves were evaluated by means of electronic microscopy of transmission and light, performing cross cuts of 60-70 nm and 1 urn in thickness for their histological analysis. The morphological findings showed a similar structure to that of an intact nerve, since the number of myelinated axons, not myelinated and the proportion "g" (which indicates the ripening degree of the axon), were similar, indicating that the regeneration of the axotomized nerves and tubulization was achieved, independently of the administered treatment.
Los nervios periféricos se pueden lesionar por traumatismos o causas mecánicas, térmicas, daño isquémico o tumoral, pudiendo presentar trastornos de la movilidad, sensibilidad y pérdida de la función motora en el área denervada. Las técnicas quirúrgicas aplicadas en la reparación nerviosa han pasado a través de varias etapas de evolución, como la técnica de tubulización, que cosiste en usar una prótesis en forma de tubo en el segmento lesionado. En este trabajo se utilizó el biomaterial quitosana para fabricar las prótesis, ya que permite incorporar a su matriz sustancias promotoras del crecimiento nervioso que se liberan de forma prolongada in situ al ser degradado por lisosomas titulares por ser de origen orgánico. Se sabe, por diversos estudios, que en el proceso de regeneración participan diversos neuroesteroides en nervios periféricos, cuyas funciones están ya descritas, como la pregnenolona. Para determinar si había o no regeneración y el grado de madurez de ésta, se utilizaron 12 hembras, adultas jóvenes, de la raza French Poodle, de entre 1 y 1.5 años de edad (cuatro se utilizaron como grupo testigo intacto, cuatro fueron tubulizadas con quitosana, y cuatro se tubulizaron con quitosana y el neuroesteroide pregnenolona, que es una hormona madre), para corregir un segmento de 15 mm que fue axotomizado. Los nervios regenerados se evaluaron mediante microscopía electrónica de transmisión y de luz, efectuando cortes transversales de 60-70 nm y ljim de espesor, para su análisis histológico. Los hallazgos morfológicos evidenciaron una estructura similar a la de un nervio intacto, ya que el número de axones mielinizados, no mielinizados y la proporción "g" (que indica el grado de maduración del axón) fueron semejantes, lo que indica que la regeneración de los nervios axotomizados y tubulizados se logró, independientemente del tratamiento aplicado.
ABSTRACT
En la actualidad, la utilización de nuevos métodos quirúrgicos para evitar el injerto nervioso, mediante el uso de compuestos bioactivos, se ha constituido en un campo emergente de biotecnología orientada a la reparación de lesiones nerviosas utilizando compuestos neurotróficos o células liberados desde el biomaterial en contacto con el tejido dañado. Hasta el presente no existen reportes del biomaterial quitosana en la tubulización de nervios craneales y como vehículo de liberación in situ de neuroesteroides. Mediante cromatografía de gases se analizó la liberación de neuroesteroides desde prótesis de quitosana implantadas vía subcutánea y el crecimiento nervioso fue analizado mediante microscopía electrónica de transmisión y análisis morfométrico a los 15 y 45 días después de la axotomía. Los neuroesteroides presentes en las prótesis de quitosana fueron liberados en un periodo mayor de 60 días. A los 15 días de la axotomía los segmentos proximal y distal de los crecimientos nerviosos tratados con neuroesteroides revelaron fibras nerviosas no mielinizados y células de Schwann los cuales mostraron diferencias significativas con respecto de los nervios vehículo. A los 45 días, se distinguieron fibras nerviosas mielinizadas de diferentes calibres y grados de mielinización. Los principales efectos favorables sobre regeneración nerviosa se observaron por la influencia de progesterona, evidenciadas por un incremento en el numero de fibras mielinizadas, diámetro, proporción g en comparación con el nervio control vehículo. Los resultados ponen de manifiesto la utilidad del biomaterial quitosana como prótesis y vehículo de liberación de neuroesteroides para promover la regeneración nerviosa.